上呼吸道感染即中醫(yī)所稱“感冒”，全年皆可發(fā)病，冬春季節(jié)多發(fā)。70%～80%的感冒由病毒引起，另有約10%的為鏈球菌、流感嗜血桿菌、葡萄球菌、支原體或衣原體引起，但臨床治療卻普遍使用抗生素。如楊永弘等[1]對(duì)某兒童醫(yī)院冬季急性呼吸道感染患者的門診處方進(jìn)行了調(diào)查，發(fā)現(xiàn)抗生素使用率高達(dá)95%。濫用抗生素不僅造成了財(cái)物的浪費(fèi)，還會(huì)破壞微生態(tài)平衡，降低免疫力，增加了耐藥菌株的產(chǎn)生，使疾病遷延不愈或繼發(fā)各種并發(fā)癥[2]。因此，利用中藥及微生態(tài)制劑防治感冒就成為了越來越多的醫(yī)務(wù)工作者關(guān)心和研究的問題。

筆者觀察了玉屏風(fēng)散及甲型鏈球菌（α-Hemolyticstrep-tococcus，簡稱甲鏈）對(duì)青霉素所致上呼吸道微生態(tài)失調(diào)小鼠口咽部菌群的調(diào)節(jié)作用，期望能從微生態(tài)角度闡釋中藥和微生態(tài)制劑在防治上呼吸道感染方面的作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1材料

昆明種小白鼠（SPF級(jí)），32只，雌雄各半，體重18～22g，購自四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所[許可證號(hào)：SCXP（川）2004-16]，實(shí)驗(yàn)期間于云南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心層流架飼養(yǎng)，自由飲食。

玉屏風(fēng)散中黃芪∶白術(shù)∶防風(fēng)=1∶2∶1（《丹溪心法》），于云南中醫(yī)學(xué)院白塔路門診部購買，云南中醫(yī)學(xué)院中藥教研室鑒定。

甲型鏈球菌、乙型鏈球菌（p-hemolyticStreptococcus，簡稱乙鏈）為云南省第一人民醫(yī)院微生物檢驗(yàn)科提供的臨床分離培養(yǎng)菌株。

1.2方法

1.2.1動(dòng)物分組情況

按隨機(jī)分組的方式將小白鼠分為4組：空白組、造模自然恢復(fù)組（以下簡稱模型組）、玉屏風(fēng)散組（以下簡稱玉組）、玉屏風(fēng)散+甲鏈組（以下簡稱玉甲組），每組8只。模型組、玉組、玉甲組連續(xù)3d腹腔注射青霉素進(jìn)行造模（根據(jù)臨床成人用量，按動(dòng)物體表面積等效劑量計(jì)算方法，每20克小鼠體重給藥0.0156g/d），空白組注射0.9%NaCl溶液；后續(xù)7d，空白組、模型組灌胃給0.9%NaCl溶液，玉組、玉甲組灌胃給玉屏風(fēng)散，玉甲組同時(shí)加口咽部滴注甲型鏈球菌；第11～13天用乙型鏈球菌經(jīng)口咽部滴注攻擊各組小鼠。

1.2.2藥液制備、給藥劑量及方法

采用水煎法煎煮玉屏風(fēng)散，并濃縮為100%濾液。將成人每日所需生藥量按動(dòng)物體表面積等效劑量計(jì)算方法換算，小鼠給藥劑量為0.312g/（d•20g），通過灌胃給藥，連續(xù)7d。

1.2.3菌液準(zhǔn)備

甲鏈接種：小鼠灌胃后半小時(shí)對(duì)口咽部滴注甲鏈菌液0.01mL（106CFu/mL）進(jìn)行接種，之后禁水禁食2h，連續(xù)3d。

乙鏈攻擊：小鼠口咽部滴注乙鏈菌液0.01mL（106CFu/mL）進(jìn)行攻擊，之后禁水禁食2h，連續(xù)3d。

1.2.4采樣方式、采樣時(shí)間及微生態(tài)指標(biāo)檢測(cè)

在小鼠咽后壁以醫(yī)用男性拭子反復(fù)涂抹取樣。樣品同時(shí)在羊血培養(yǎng)基和巧克力培養(yǎng)基上培養(yǎng)，對(duì)菌群進(jìn)行純化、染色、鏡檢以及生化鑒定。

通過檢測(cè)菌群密集度、甲型鏈球菌、菌群多樣性三項(xiàng)指標(biāo)來反映小鼠口咽部微生態(tài)情況，時(shí)間分別為：第1天（造模前）、第4天（造模后）、第11天（攻擊前，即給藥后）、第14天（攻擊后）。

菌群密集度為每毫升樣本中的菌落形成單位（colonyformingunit，CFU），甲型鏈球菌數(shù)量為每毫升樣本中的甲鏈菌落形成單位，菌群多樣性指標(biāo)為每個(gè)樣本所含的菌屬數(shù)量總和。如造模后小鼠口咽部菌群種類和數(shù)量明顯減少，有對(duì)抗生素不敏感的細(xì)菌出現(xiàn)，則表示造模成功[3-4]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

對(duì)分布呈偏態(tài)的數(shù)據(jù)以M（QR）[中位數(shù)（四分位數(shù)間距）]表示，通過Excel2003和SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用秩和檢驗(yàn)，經(jīng)Kruskal-WallisH檢驗(yàn)后，兩兩比較進(jìn)行秩轉(zhuǎn)換后采用LSD法進(jìn)行。

2結(jié)果

2.1造模前后小鼠口咽部菌群密集度、甲型鏈球菌、多樣性的比較

結(jié)果顯示：小鼠口咽部菌群密集度、甲鏈數(shù)量、菌群多樣性（P=0.000，P=0.000，P=0.000）在造模后均大幅降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，三項(xiàng)指標(biāo)造模前后的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明小鼠上呼吸道菌群失調(diào)模型制作成功。

2.2乙型鏈球菌攻擊前后小鼠口咽部微生態(tài)指標(biāo)比較（乙鏈攻擊前后比較）

見表2。攻擊后與攻擊前相比，空白組、玉組菌群密集度減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.010，P=0.013）；空白組、玉組和玉甲組甲鏈數(shù)量均明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.003，P=0.000，P=0.000）；模型組菌群多樣性減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.030）。

乙鏈攻擊后各組與空白組比較，模型組、玉組和玉甲組菌群密集度均高于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.030，P=0.003，P=0.000）；玉組、玉甲組甲鏈數(shù)量高于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.004，P=0.011）；各組的菌群多樣性與空白組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

乙鏈攻擊后各組與模型組比較，菌群密集度、甲鏈數(shù)量、菌群多樣性的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3討論

上呼吸道感染，即感冒患者常伴隨有口咽部菌群失調(diào)的狀況[5-6]。正常人體口咽部保持微生態(tài)平衡，存在著以甲型鏈球菌為主的多種菌群。國內(nèi)外學(xué)者[7-10]的研究均發(fā)現(xiàn)，呼吸道感染后出現(xiàn)微生態(tài)失調(diào)，條件致病菌代替了優(yōu)勢(shì)菌，應(yīng)用抗生素后又出現(xiàn)菌群抑制現(xiàn)象，所有生態(tài)裸露菌明顯減少，其中在正常人群呼吸道表現(xiàn)為優(yōu)勢(shì)菌的甲型鏈球菌的變化最為明顯。表明呼吸道正常菌群在抵抗病原菌的入侵，預(yù)防呼吸道感染，提高治愈水平方面發(fā)揮著重要作用。

玉屏風(fēng)散由黃芪、白術(shù)、防風(fēng)三味藥組成，載于元代著名醫(yī)家朱震亨的《丹溪心法》，是中醫(yī)扶正固本的經(jīng)典方劑，臨床常用于防治體虛感冒，療效甚佳[11]。玉屏風(fēng)散可以提升患者的“正氣”以抵御外邪。方中黃芪益氣固表止汗為君，白術(shù)補(bǔ)氣健脾為臣，佐以防風(fēng)走表而散風(fēng)邪。前兩味藥，以扶正為主，而防風(fēng)則以祛邪為主，該方正是“標(biāo)本兼治”的巧妙結(jié)合。本研究團(tuán)隊(duì)的前期研究結(jié)果[3-4]表明玉屏風(fēng)散治療感冒的機(jī)理之一可能是通過扶持機(jī)體正氣，促使口咽部的微生態(tài)狀態(tài)由失衡轉(zhuǎn)為平衡。筆者在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步觀察了在遭受致病菌攻擊的情況下，玉屏風(fēng)散加甲鏈共同作用對(duì)上呼吸道微生態(tài)的調(diào)節(jié)作用。

乙型鏈球菌族型眾多，其A、B、C、D、F、G族對(duì)人類有致病能力。其中A族乙型溶血性鏈球菌為溶血性鏈球菌中最常見的且致病力最強(qiáng)的病原菌，是急性呼吸道感染尤其是上呼吸道感染的重要致病原。常見上呼吸道感染的細(xì)菌性感染病例中，乙鏈感染占90%以上，且常發(fā)生在2~13歲兒童[12]。患者尤其是兒童如不及時(shí)接受抗感染治療，可能導(dǎo)致急性扁桃體炎、猩紅熱、風(fēng)濕性心臟病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和急性腎小球腎炎等嚴(yán)重疾病。