農業論文代理苦蕎浸泡酒中總黃酮的測定

　　摘要：通過精密度、穩定性、重現性、回收率等試驗評價了苦蕎及其制品中總黃酮常用的檢測方法，并探討應用于苦蕎酒中總黃酮含量測定的可行性。同時，對影響苦蕎保健泡酒中黃酮含量的兩大因素(時間和固液比)進行了單因素試驗，確定這兩種因素對提高黃酮在白酒中溶出率的較適宜范圍。結果表明，該方法應用于苦蕎酒的檢測時有較好的精密度、穩定性、重現性和回收率，變異系數分別為3.30%、3.26%、1.81%、3.36%，說明該法同樣適用于苦蕎酒中總黃酮含量的測定，并采用此方法確定苦蕎浸泡酒(55%，V/V)最佳浸泡時間為10 d，最佳固液比為1∶20。

　　關鍵詞：苦蕎浸泡酒;總黃酮;溶出率

　　苦蕎麥是蓼科蕎麥屬的植物，為我國特有的蕎麥品種，主產于大涼山2 000 m以上的高寒山區，是一種藥食兩用植物[1，2]。現代科學研究證明，苦蕎麥具有很高的營養價值，并含有其他谷物所不含有的黃酮類物質，苦蕎黃酮具有降血脂、降血糖、抗氧化、抗癌等多種功效。隨著人們對苦蕎黃酮化合物研發的深入，其營養價值和藥用價值越來越受到關注[3，4]。黃酮在水中的溶解度較小，而在乙醇中有較高的溶解度，因此苦蕎保健酒，有效地提取了苦蕎的功能成分，具有較高的營養保健作用，是一種低度、高營養的保健品，經常適量飲用苦蕎酒可防毛細血管的脆性和滲透性出血，預防糖尿病、高血脂、冠心病、風濕病等，并且有強筋骨、健脾胃、祛風濕、壯腎氣之功效[5-7]。

　　目前，苦蕎麥中總黃酮含量的測定通常采用中華人民共和國農業部發布的標準[8]，該標準采用分光光度法只針對蕎麥及其制品中的總黃酮含量的測定，未包括苦蕎浸泡酒中總黃酮含量測定。本研究綜合相關測定方法[9-12]應用于苦蕎浸泡酒中黃酮含量的測定，通過精密度、穩定性、添加回收率試驗，最終建立了苦蕎浸泡酒中總黃酮含量的測定方法，旨在為相關單位或企業在測定苦蕎泡酒總黃酮含量時提供參考。同時，對影響苦蕎浸泡酒黃酮含量的兩大因素，即時間和固液比進行了單因素試驗，確定這兩種因素對提高苦蕎中黃酮在白酒中溶出率的較適宜范圍，為人們日常生活中泡制苦蕎保健酒提供參考[13，14]。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 原料與試劑 航飛維苦蕎茶(西昌航飛苦蕎科技發展有限公司);野蕎神清香型白酒(55%，V/V; 西昌航飛苦蕎科技發展有限公司)。蘆丁標準溶液(國家標準物質中心)，甲醇、三氯化鋁、乙酸鉀均為分析純(國藥集團上海試劑公司)。

　　1.1.2 儀器設備 電熱鼓風干燥箱(北京市永光醫療儀器廠);ESJ210-4B型電子天平(沈陽龍騰電子有限公司);722G型可見分光光度計(上海精密科學儀器有限公司);電熱恒溫水浴鍋(北京市長風儀器儀表公司)。

　　1.2 苦蕎泡酒中黃酮測定方法的評價

　　1.2.1 苦蕎泡酒的制備方法 稱取2.0 g的苦蕎茶，置于150 mL三角瓶中，加入白酒50 mL，常溫下放置10 d，過濾后的濾液即為苦蕎浸泡酒，設置3個重復。吸取1.0 mL浸泡酒置于10 mL容量瓶中，用70%甲醇溶液定容至刻度，搖勻，靜置30 min，待測。

　　1.2.2 標準曲線的繪制方法 用移液管吸取20 mg/mL 蘆丁標液2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mL分別置于 50 mL 容量瓶中，加入2 mL 0.1 mol/L 三氯化鋁溶液和3 mL 1.0 mol/L 乙酸鉀溶液，用70%的甲醇溶液定容至刻度，搖勻，靜置30 min。同時作空白對照。標準曲線中蘆丁質量濃度分別為0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mg/mL。在波長420 nm處測定吸光度。以吸光度為縱坐標、蘆丁質量濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得到的標準曲線線性關系良好，回歸方程為：y=0.006 4-0.001 5x(R2=0.997 9)。

　　1.2.3 總黃酮含量的測定方法 吸取苦蕎泡酒1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L三氯化鋁溶液2 mL，1 mol/L 乙酸鉀溶液3 mL，用70%的甲醇溶液定容至10 mL，搖勻，放置30 min，在420 nm處測定其吸光值。依據上述標準曲線，得出總黃酮的濃度值。

　　1.2.4 苦蕎泡酒中總黃酮含量的計算方法 苦蕎酒中總黃酮含量以蘆丁的質量計，稀釋倍數數值以V表示，按公式計算。

　　w= C·V/1000

　　式中，C為由標準曲線計算得出的總黃酮濃度，mg/mL;V為總稀釋倍數。

　　1.2.5 精密度試驗 吸取浸泡酒1 mL，置于10 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，連續測定吸光度5次，計算出泡酒中黃酮含量。

　　1.2.6 穩定性試驗 吸取浸泡酒1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入2 mL 0.1 mol/L 三氯化鋁溶液和3 mL 1 mol/L 乙酸鉀溶液，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min。分別在放置0、15、30、45、60、90 min時測定其吸光度，計算出泡酒中黃酮含量。

　　1.2.7 重現性試驗 分別吸取浸泡酒1.0 mL 5份，于10 mL容量瓶中，加入 0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，測定其吸光度，并計算出苦蕎酒中黃酮含量。

　　1.2.8 回收率試驗 分別吸取浸泡酒樣品1.0 mL 5份，置于10 mL容量瓶中，再準確加入1 mL蘆丁標準溶液(1.0 mg/mL)，同樣0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，70%甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，測定其吸光度，計算出浸泡酒中黃酮含量。